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關于細胞因子試劑盒的實驗操作流程,以下有詳細說明

  在細胞因子試劑盒中通常有3次加樣步聚,即加標本,加酶聯絡物,加底物。加樣時應將所加物加在細胞因子試劑盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留心不可濺起,不可發生氣泡。加標本通常用微量加樣器,按規矩的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴,防止發作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
 
  實驗操作流程:
  1、加抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干
  2、加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干
  3、加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干
  4、加底物液 → 37℃ 15分鐘,加終止液
 
  細胞因子試劑盒的操作步驟:
  1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差;
  2、根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內;
  3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時;
  4、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次;
  5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘;
  6、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次;
  7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照;
  8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果;
  9、在450nm波長處測定各孔的OD值。

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