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細說多克隆抗體的制備流程和結果判定

  多克隆抗體一般通過免疫接種合適的哺乳類動物而產生,例如小鼠、兔子或者山羊。通常更傾向于采用大型哺乳類動物,因為可以采集更多的血清。首先將抗原注射到哺乳動物體內,誘導B-淋巴細胞產生抗原特異性的免疫球蛋白 (IgG)。該哺乳動物血清經過純化可得到多克隆IgG。
 
  多克隆抗體制備流程:
  1、抗原制備:
  a、蛋白抗原制備:擁有密碼子優化平臺及可溶性蛋白表達平臺,可得到>90%純度的可溶性抗原;
  b、多肽抗原制備:針對特定的蛋白結合位點序列設計合成多肽,并與KLH綴合用于免疫。
  2、免疫宿主:每只宿主進行4次免疫,包括初次免疫和3次加強免疫。
  3、抗體純化:提供兩種抗體純化方法,即抗原親和純化和Protein A/G純化。
 
  結果判定:
  1、抗Ig的效價測定:瓊脂擴散效價達1﹕16或1﹕32者為合格。
  2、純度鑒定:采用瓊擴法。中間孔加抗Ig血清,外周孔加Ig和標準品Ig。在抗Ig與I抗原上那部分可以引起機體產生抗體的分子結構,叫做抗原決定簇。一個抗原上可以有好幾個不同的抗原決定簇,因而使機體產生好幾種不同的抗體,最終產生出抗體是漿細胞。只針對一個抗原決定簇起作用的漿細胞群就是一個純系,純系的英文為Clone,音譯就是克隆。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就象島彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。

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