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原代細胞在實際中應該如何運輸和保存?

  原代細胞的原理在不加任何條件下直接凍存細胞時,細胞內和外環境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
 
  細胞復蘇時速度要快,使之迅速通過細胞最易受損的-5~0℃,細胞仍能生長,活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。
 
  原代細胞的特性:
  1、組織來源于實驗動物的正常主動脈組織。
  2、細胞鑒定:平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色為陽性。
  3、經鑒定細胞純度高于90%。
  4、不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
  5、細胞生長方式:上皮樣,多角形細胞,貼壁培養。
 
  產品的運輸和保存:
  視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
  1、1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
  2、T-25培養瓶充滿完全培養基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

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