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人白介素6試劑盒

簡要描述:

人白介素6試劑盒?規格: 96T檢測范圍: 4.69pg/ml→300pg/ml。敏感性: <0.3pg/ml特異性: 系統和其它細胞因子無交叉反應。保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養上清、細胞裂解液

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人白介素6試劑盒
規格: 96T
檢測范圍: 4.69pg/ml→300pg/ml。
敏感性: <0.3pg/ml
特異性: 系統和其它細胞因子無交叉反應。
保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。
有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養上清、細胞裂解液
人白介素6試劑盒工作原理
Interleukin-6 ,IL-6,白介素-6。IL-6 是一種多功能細胞因子,在體內免疫反應調節、血細胞的
增生、防御機制和急性期反應中起中心作用。既可由淋巴細胞產生,也能由非淋巴細胞合成,如
單核/巨噬細胞,纖維母細胞,肝細胞,角化細胞,星形細胞,血管內皮細胞和各種腫瘤細胞。IL-6
的合成受多種細胞因子、核分裂因子和抗原的刺激而增加。IL-6 是一種糖蛋白,包含 N-和 O-連
碳水化合物,分子量 21KD-28KD。其糖蛋白成份并非功能所必須。人的 IL-6 的前體有 212 個氨
基酸,切除 N-端 28 個氨基酸后,形成 184 個氨基酸的成熟蛋白質。本試劑盒所用的標準品為重
組人 IL-6,有 184 個氨基酸,分子量 20.3KDa。
所提供的 IL-6 ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒(Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA)。預先包被的抗體為單克隆抗體。檢測相抗體為單克隆抗
體,經生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS 或 TBS 洗
滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經過 PBS 或 TBS 的徹底洗滌后用底物 TMB 顯色。
TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
品中的 IL-6 呈正相關。

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內,浸泡 1-2 分鐘。根據需要,重復此過程數次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

樣品的準備和保存

樣品如果不立即分析,應分裝后冷凍保存,且避免反復凍融。

細胞培養上清——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固 30 分鐘,離心 1500×g 15 分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血,抽血后 30 分鐘內離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進一步離心 10000×g 10 分鐘,以完全清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細胞裂解液——對于貼壁細胞,去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液,用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常 10 秒后,細胞就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液,用槍吹打把細胞吹散,用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后,10000—14000g 離心 3-5 分鐘,取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則

用戶須估計樣品待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據待測因子含量高、中、低的不同,分別采取不同的

稀釋方案

高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1:100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。

中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1:10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。

低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1:2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。

特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋,或按 1:2 稀釋。

操作程序總結:

1. 加樣品和標準品,37℃反應 90 分鐘。不洗。

2. 加生物素標記抗體,37℃反應 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。

3. 加 ABC,37℃反應 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。

4. TMB37℃反應 15-20 分鐘。

5. 加入 TMB 終止液,讀數。

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