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Tfl DNA聚合酶

簡要描述:

Tfl DNA聚合酶Tfl DNA Polymerase (Tfl DNA 聚合酶) 是從黃色棲熱菌(Thermus flavus ) 中提取的熱穩定性酶,分子量大約為94kDa。這種酶可在74℃復制 DNA,在95℃的半衰期為40 分鐘。Tfl DNA 聚合酶在鎂離子存在的條件下可催化核苷酸沿5` → 3` 方向發生聚合反應,形成雙鏈DNA;也可在鎂離子存在條件下以RNA 為模板沿5` → 3`

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Tfl DNA聚合酶

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Tfl DNA聚合酶

100 U

390元

 

Tfl DNA Polymerase (Tfl DNA 聚合酶) 是從黃色棲熱菌(Thermus flavus ) 中提取的熱穩定性酶,分子量大約為94kDa。這種酶可在74℃復制 DNA,在95℃的半衰期為40 分鐘。Tfl DNA 聚合酶在鎂離子存在的條件下可催化核苷酸沿5` → 3` 方向發生聚合反應,形成雙鏈DNA;也可在鎂離子存在條件下以RNA 為模板沿5` → 3`方向合成DNA。該酶具有5` → 3` 外切酶活力。當使用Tfl DNA 聚合酶進行PCR 反應和引物延伸反應時,推薦在較高溫度條件下進行。本產品隨酶提供的10× 反應緩沖液中不含有Mg2+。單獨提供足量的25mM MgSO4 溶液以便于在不同條件下優化酶反應。 
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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